2025-08-26
デスロラタジンは、AERIUS (Schering-Plough)/DENOSIN (Metha)としても知られ、三環系の長時間作用型第三世代ヒスタミン拮抗薬です。慢性特発性蕁麻疹および通年性アレルギー性鼻炎に関連する全身性および局所性の症状を緩和するために一般的に使用されます。その構造に二次アミンが存在するため、デスロラタジンは対応するNDSRI不純物を生成する可能性があります。そのニトロソアミン不純物の構造は、以下の図1に示されています。FDAの医薬品中のニトロソアミン不純物の管理に関するガイダンスによると、N-ニトロソ-デスロラタジンの許容摂取量（AI）値は400ng/日です。
図1 デスロラタジンとN-ニトロソ-デスロラタジンの構造図
ニトロソアミン不純物のAI値は400ng/日です。デスロラタジン経口溶液の承認された指示書に記載されている最大1日用量5mg/日に基づくと、管理限界は80ppmです。 確立された管理限界に従い、デスロラタジン原薬（API）中のニトロソアミン不純物を測定するための高速液体クロマトグラフィー（HPLC）法が開発されました。Wayeal’s LC3400シリーズHPLCシステム（紫外線（UV）検出器を搭載）を使用して、方法のバリデーションが実施されました。バリデーションには、特異性、直線性、精度、再現性、検出限界などが含まれました。結果は、この方法が特異的かつ高感度であることを示しました。
キーワード：デスロラタジン、高速液体クロマトグラフィー、NDSRI不純物
1. 機器と試薬
1.1 高速液体クロマトグラフの構成リスト
|
No. |
モジュール |
数量 |
|
1 |
UV3400 UV検出器 |
1 |
|
2 |
P3400Bバイナリ高圧ポンプ |
1 |
|
3 |
CT3400カラムオーブン |
1 |
|
4 |
AS3400オートサンプラー |
1 |
|
5 |
SmartLab NetCDSワークステーション |
1 |
|
6 |
C18 250*4.6mm、5μm |
1 |
1.2 試薬と標準溶液のリスト
表2 試薬と標準溶液の表
|
No. |
試薬と標準品 |
純度 |
|
1 |
アセトニトリル |
HPLCグレード |
|
2 |
トリフルオロ酢酸 |
AR |
|
3 |
ドデシル硫酸ナトリウム |
AR |
|
4 |
N-ニトロソ-デスロラタジン |
98.9% |
1.3 実験材料と補助機器
超音波洗浄器
ボルテックスミキサー
2. 実験方法
2.1 溶液の調製
2.1.1 ドデシル硫酸ナトリウム（SDS）水溶液： ドデシル硫酸ナトリウム0.865gを量り、トリフルオロ酢酸0.5mLを加えます。水を加えて1000mLにし、完全に溶解するまでよく混ぜます。
2.1.2 溶媒： 移動相と同じ（ドデシル硫酸ナトリウム水溶液570mLとアセトニトリル430mLを正確に測定し、よく混ぜて使用準備をします）。
2.1.3 線形溶液： N-ニトロソ-デスロラタジン標準品を適量正確に量り、移動相で溶解および希釈して、約0.8μg/mLの溶液を標準原液として得ます。次に、標準原液1.0mL、1.5mL、2.0mL、4.0mL、10.0mLを5つの100mLメスフラスコにそれぞれ正確にピペットで量ります。移動相で容量まで希釈し、よく混ぜて、8ng/mL、12ng/mL、16ng/mL、32ng/mL、80ng/mLの濃度の標準系列作業曲線を作成します。
2.1.4 標準溶液： N-ニトロソ-デスロラタジン標準品を適量正確に量り、移動相で溶解および希釈して、約16ng/mLのN-ニトロソ-デスロラタジンを含む溶液を標準溶液として調製します。
2.2 サンプルの調製
2.2.1 サンプル溶液
デスロラタジンAPIを適量正確にピペットで量り、移動相で溶解および希釈して、約0.2mg/mLのデスロラタジンを含む溶液をサンプル溶液として調製します。
2.2.2 精度溶液
デスロラタジンAPIを約20mg量り、100mLメスフラスコに入れます。N-ニトロソ-デスロラタジン標準溶液を適量加え、溶解および希釈して、100％スパイクサンプルを調製します。よく混ぜて精度溶液を得ます。
3. 実験結果
3.1 特異性
図2 特異性試験クロマトグラム
注：溶媒はN-ニトロソ-デスロラタジンの検出を妨げず、試験溶液中の他の不純物ピークもN-ニトロソ-デスロラタジン不純物の測定を妨げません。
3.2 直線性試験
図3 N-ニトロソ-デスロラタジン不純物試験の重ね合わせクロマトグラム
図4 N-ニトロソ-デスロラタジン不純物の標準曲線
注：実験結果は、N-ニトロソ-デスロラタジン不純物試験の線形相関係数（R）が0.999を超え、試験要件を満たしていることを示しています。
3.3 再現性試験
図5 16 ng/mL標準品の再現性クロマトグラム（6回の注入）
表3 16 ng/mL標準品の再現性試験データ（6回の注入）
|
化合物 |
保持時間（分） |
|
N-ニトロソ-デスロラタジン |
15.426 |
|
15.432 |
|
|
15.414 |
|
|
15.416 |
|
|
15.432 |
|
|
15.417 |
|
|
平均 |
15.421 |
|
RSD（％） |
0.045 |
注：上記の表のデータに基づくと、N-ニトロソ-デスロラタジンの保持時間の再現性は0.045％、ピーク面積の再現性は2.043％であり、良好な再現性を示しています。
3.4 精度試験
図6 デスロラタジンAPIの精度重ね合わせクロマトグラム
表4 デスロラタジンAPIの精度（N-ニトロソ-デスロラタジン）
|
レベル |
既知の値（ng） |
スパイク（ng） |
測定値（ng） |
回収率（％） |
平均（％） |
|
100% |
0.00 |
1611.52 |
1656.365 |
99.690 |
100.11 |
|
100% |
0.00 |
1610.546 |
96.932 |
||
|
100% |
0.00 |
1686.721 |
101.517 |
||
|
100% |
0.00 |
1704.476 |
102.585 |
||
|
100% |
0.00 |
1615.701 |
97.242 |
||
|
100% |
0.00 |
1706.194 |
102.689 |
注：6つのサンプルにおけるN-ニトロソ-デスロラタジンの回収率は97.24％から102.69％の範囲であり、RSDは2.58％でした。これらの結果は、この方法がこの不純物の検出に関して優れた精度と再現性を達成していることを示しています。
3.5 検出限界（LOD）試験
図7 8ng/mLのN-ニトロソ-デスロラタジン標準品のクロマトグラム
表5 8ng/mLのN-ニトロソ-デスロラタジン標準品の試験データ
|
化合物 |
保持時間（分） |
ピーク面積（mAU*s） |
SNR |
|
N-ニトロソ-デスロラタジン |
15.434 |
1.213 |
30.042 |
注：上記の表の8ng/mLのN-ニトロソ-デスロラタジン標準品の試験データに基づくと、3倍の信号対雑音比を使用して計算された理論的な検出限界（LOD）は0.7989ng/mLです。
3.6 特定のメーカーの原料試験
図8 特定のメーカーのAPI試験のクロマトグラム
注：APIではN-ニトロソ-デスロラタジンは検出されませんでした。
4. 結論
ニトロソアミン不純物N-ニトロソ-デスロラタジンに関する研究は、ニトロソアミン医薬品関連不純物（NDSRIs）の許容摂取量の設定に関する最近発行されたFDAガイダンス文書に基づいて、デスロラタジン原薬（API）で実施されました。文書によると、許容摂取量（AI）値は400ng/日に設定されています。製品の最大1日用量（5mg）と組み合わせると、APIの管理限界は80ppmを超えてはなりません。方法論的バリデーションは、Wayealの高速液体クロマトグラフィー（HPLC）システムLC3400シリーズ（紫外線（UV）検出器を搭載）を使用して実施されました。バリデーションされた分析方法は、原薬サンプルを試験するために適用され、ニトロソアミン不純物（N-ニトロソ-デスロラタジン）は検出されませんでした。上記のデータはすべて、薬局方方法の機器の要件を満たしています。
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