2025-12-17
この実験は"GB 31658"を参照します22-2022 National Food Safety Standard — Determination of β-Agonist Residues in Animal-Derived Foods by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry" and utilizes the Wayeal LCMS-TQ9200 liquid chromatography-tandem mass spectrometry system to determine the content of β-agonists in pork実験結果は,システムの適性試験で,実験要求を満たす形状の良いピークと良い線性を示したことを示しています.β-アゴニスト標準働き溶液のリテンション時間の繰り返しは1%未満でした.β-アゴニストの敏感性試験溶液では,主要ピークの信号対ノイズ比は0の濃度で.2ng/mL と 0.5ng/mL は 3 と 10 を分別的に大幅に上回り,実験要件を満たしました.
豚肉のサンプル試験ではβ-アゴニストは検出されなかった.上記すべてのデータは標準方法で指定された機器要件を満たしている..
キーワード:液体染色体-タンデム質量スペクトロメトリ β-アゴニスト クレンブテロール 食品安全
1道具と反応剤
1.1 LCMSの構成リスト
表 1 計器配置リスト
| 違う 違う | モジュール式 | Qty |
| 1 | LCMS-TQ9200 | 1 |
| 2 | P3600B 二重型高圧恒定ポンプ | 1 |
| 3 | CT3600 コラムオーブン | 1 |
| 4 | AS3600 オートサンプラー | 1 |
| 5 | スマートラボ CDS 2.0 クロマトグラフィー ワークステーション | 1 |
1.2 反応剤と基準
表 2 反応剤と基準のリスト
| 違う 違う | 反応剤/標準 | 純度 |
| 1 | メタノール | LC-MSグレード |
| 2 | エタノール | LC-MSグレード |
| 3 | リン酸 | LC-MSグレード |
| 4 | アモニウムアセタート | 解析度 |
| 5 | β-グルキュロニダース/アリルスルファタース | 30 U/60 U/mL |
| 6 | 塩素酸 | 70% |
| 7 | エチルアセタート | 解析度 |
| 8 | tert-ブチルメチルエーテル | 解析度 |
| 9 | アモニア溶液 | 解析度 |
| 10 | クレンブテロール 標準 | 98% |
| 11 | クレンブテロールD9標準 | 98% |
| 12 | ラクトパミン標準 | 98% |
| 13 | ラクトパミン-D6 標準 | 98% |
| 14 | シマテロール 標準 | 98% |
| 15 | サルブタモール 標準 | 98% |
| 16 | サルブタモル-D3 標準 | 98% |
| 17 | ターブタリン標準 | 98% |
| 18 | ターブタリン-D9 標準 | 98% |
| 19 | チュロブテロール 標準 | 98% |
| 20 | シンブテロール 標準 |
98% |
1.3 実験用材料と補助機器
超音波クリーナー
渦巻きミキサー
水浴 恒温 シェイカ
高速遠心機
2実験方法
2.1 サンプル予備処理
2.1.1 酵素水解と抽出
2gのサンプル (精度 ±0.05g) を50mLの遠心分離管に重量化し,0.2mol/Lのアンモニアアセテートバッファ溶液の6mLとβ-グルキュロンイダース/アリル硫ファタースの40μLを加える.暗闇で37°Cで16時間水浴で揺さぶって育てる.室温まで冷却し,後に使用します.
2.1.2 抽出,浄化,濃縮
準備した溶液を採取し,100ng/mLの内部標準作業溶液100μLを加え,徹底的に混ぜるため渦を巻き,8分間にわたって8000r/minで遠心分離します.上位溶液を集め,0の5mLを加えます.1mol/L ペルクロリック酸溶液塩素酸を用いてpHを1.0 ± 0.2に調整し,8分間8000r/minで遠心分離した後,上位液のpHを10 ± 0に調整する.5 10mol/L のナトリウムヒドロキシード溶液を用いて. エチルアセタート15mlを加え,中速で5分間揺れて,5分間5000r/minで遠心分離します.上部有機層を集めます.残りの水性層に,10mLの tert-ブチルメチルエーテルを加える中間速度で5分振って,5分間5000r/minで遠心分離し,上部有機層を集め,すべての有機層を組み合わせ,50°Cの窒素流の下で蒸発して乾燥します.残留物を2%のカミソリ酸溶液の5mlに溶かして置く.混合モードカチオン交換固体相抽出柱を3mlメタノールと3ml2%アシドアリウムで連続的に活性化して準備する.準備した溶液を柱に積む.2%のカビ酸3mlとメタノール3mlで順次洗浄する塩基配列は,塩基配列の表面に溶け,塩基配列は,塩基配列の表面に溶け,塩基配列は,塩基配列の表面に溶け,塩基配列は,塩基配列の表面に溶け,塩基配列は,塩基配列の表面に溶け,塩基配列は,塩基配列の表面に溶け,塩基配列は,塩基配列の表面に溶け,塩基配列は,塩基配列の表面に溶け,塩基配列は,塩基配列の表面に溶け,塩基配列は,塩基配列の表面に溶けます.1% 溶液 (10:90, v/v) を徹底して混ぜ,0.22μmの微孔膜をフィルタリングし,液体染色体とタンデム質量スペクトロメトリによる分析を行う.
2.2 実験条件
2.2.1 液体染色体条件
クロマトグラフィー列 C18,1.8μm 2.1*100mm
移動相:A:水中の0.1%アシド;B:メタノール
流量: 0.3 mL/min
コラム温度: 40°C
インジェクション体積: 3μL
3システムの適性試験
システムの適性試験は,他の不純度ピークからの干渉なしに,目標ピークが良好な形状で,実験要件を満たしていることを示しています.
図 1 七つのβ-アゴニストの染色体検査 (1ng/mL)
3.2 線形範囲
β-アゴニスト標準溶液と中間濃度の作業溶液を用いて,標準曲線を段階的に作成しました.R2 > 0 で.99線形的な関係を示しています
表 3 β-アゴニストの線形範囲表
| 化合物 | 線形範囲 | 回帰方程式 | 線形相関系数 (R2) |
| クレンブテロール | 0.5-50 ng/mL | この式は,1024 | 0.9973 |
| ラクトパミン | 0.5-50 ng/mL | この式は,この式を3324 | 0.9982 |
| シマテロール | 0.5-50 ng/mL | この式は,1270 | 0.9960 |
| サルブタモール | 0.5-50 ng/mL | この式は,0644 | 0.9973 |
| ターブタリン | 0.5-50 ng/mL | この式は,1353 | 0.9972 |
| トルボウテロール | 0.5-50 ng/mL | この式は,1041 | 0.9988 |
| シンブテロール | 0.5-50 ng/mL | この式は,0255 | 0.9990 |
図 2 標準曲線色素図 7 β-アゴニスト
3.3 検出制限 (LOD) と定量制限 (LOQ)
この方法では,β-アゴニストの検出限界 (LOD) と定量制限 (LOQ) はそれぞれ0.2ng/mLと0.5ng/mLに設定されます.この方法では,各化合物に対して,LODとLOQの指定濃度の信号/ノイズ比が3と10以上である実験の感度要件を満たす.
表 4 各化合物のLODとLOQの対応する信号/ノイズ比
| 化合物 | シグナル/ノイズ比 (S/N) | |
| LOD | LOQ | |
| クレンブテロール | 19.65 | 67.23 |
| ラクトパミン | 61.88 | 114.61 |
| シマテロール | 16.34 | 61.02 |
| サルブタモール | 34.22 | 90.29 |
| ターブタリン | 44.58 | 110.99 |
| トルボウテロール | 20.07 | 68.48 |
| シンブテロール | 4.80 | 14.67 |
図 3 LODとLOQ濃度の7つのβ-アゴニストのイオン染色体
3.4 精度試験
低濃度,中濃度,高濃度のβ-アゴニスト標準物質の混合溶液を採取し,保持時間とピークエリア偏差を比較するために6回連続して注入しました.結果は以下の表に示されています.すべてのβ-アゴニストは,リテンション時間の偏差が1%未満,ピークエリアの偏差が3%未満を示し,実験要求を満たしました.
表 5 各化合物の精度試験
|
化合物 |
濃度 (ng/mL) |
保持時間 RSD (%, n=6) |
ピークエリアRSD (%, n=6) |
|---|---|---|---|
| クレンブテロール | 1 | 0.16 | 2.40 |
| 5 | 0.13 | 1.78 | |
| 20 | 0.00 | 2.32 | |
| ラクトパミン | 1 | 0.21 | 2.14 |
| 5 | 0.15 | 2.72 | |
| 20 | 0.21 | 1.69 | |
| シマテロール | 1 | 0.20 | 1.92 |
| 5 | 0.11 | 2.55 | |
| 20 | 0.14 | 2.41 | |
| サルブタモール | 1 | 0.17 | 1.37 |
| 5 | 0.23 | 1.66 | |
| 20 | 0.35 | 2.44 | |
| ターブタリン | 1 | 0.36 | 2.52 |
| 5 | 0.23 | 2.64 | |
| 20 | 0.36 | 1.36 | |
| トルボウテロール | 1 | 0.13 | 1.19 |
| 5 | 0.10 | 1.69 | |
| 20 | 0.10 | 1.70 | |
| シンブテロール | 1 | 0.35 | 1.28 |
| 5 | 0.39 | 2.62 | |
| 20 | 0.38 | 1.65 |
図4 7つのβ-アゴニスト (6回の注射) の精密検査染色体
3.5 サンプル試験
市場から購入された豚肉のサンプルは,前処理方法に従って検査され,β-アゴニストは検出されなかった.7つのβ-アゴニストに対応するリテンションタイムでは染色体ピークは観察されなかった.他のピークは酵素水解後のマトリックス信号を表します.
図 5 豚肉のサンプル検査染色体
4結論
この方法では,豚肉におけるβ-アゴニストの決定のために,Wayeal LCMS-TQ9200液体染色体とタンデム質量スペクトロメトリシステムを使用します.データは,すべての染色体ピークが尾根なしで良好な形を示していることを示しています実験要求を満たす 線形相関係数は0を超えています99保持時間偏差が1%未満でピークエリア偏差が3%未満で,各化合物の6回の連続注射で精度が満足できます.豚肉のサンプル試験ではβ-アゴニストは検出されなかった.これらの結果は,Wayeal LC-MS/MSシステムで装備されたこの方法が,標的分析物に対する通常の定量および定量的検出要件を満たしていることを示しています.
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