鶏肉におけるアンフェニコル抗生物質残留物の決定 Wayeal LCMS-TQ9200

キーワード:LCMS,アンフェニコル,食品安全,獣医薬の残留物

1装置と反応剤

1.1 LCMSの構成リスト

表 1 計器配置リスト

1.3 実験用材料と補助機器

超音波クリーナー

渦巻きミキサー

水浴の窒素蒸発機

高速遠心機

2実験方法

2.1 溶液の調製

2.1.1 2%のアモニアエチルアセタート溶液: 4mlのアンモニア水を取り,エチルアセタートで200mlに稀釋する.

2.1.2 4%ナトリウム塩化物溶液: 4gのナトリウム塩化物を取り,水に溶かして100mLまで稀釋する.

2.1.3 4%のナトリウム塩化物飽和 n-ヘクサンの溶液:適量の 4%のナトリウム塩化物溶液を取り,過剰な n-ヘクサンを加え,混合し,層を分離させる.そして上部 n-ヘクサン層を.

2.1.4 混合した内部標準作業溶液: 混合した内部標準原料溶液の適切な量を取ります.メタノールで20%を希釈し,10ng/mLおよび他の内部基準 (フロルフェニコル-D3) でクロラムフェニコル-D5を得ますティアンフェニコル-D3とフロルフェニコルアミン-D3) それぞれ50ng/mlで

2.2 サンプル予備処理

2.2.1 抽出: 2g のサンプルを重量化 (精度 ±0.01g) し, 100μL の混合した内部標準作業溶液を加え,1分間渦巻き, 10% の 2% のアモニアエチルアセタート溶液を加える.10分間の渦余液に2%のアモニオンエチルアセタート溶液の10mlを追加し,抽出手順を繰り返す.2つのスーパーナタントを組み合わせる50°Cで窒素の流れの下で蒸発して乾燥し,使用のために保存します.

2.2.2 試料の浄化: 浄化残留物に3mlの4%塩化ナトリウム溶液を加え,渦を溶ける.それから5mlの4%塩化ナトリウム飽和nヘクサン溶液を加え,渦を30秒間,遠心分離機 8000 rpm で 5 分間脱脂手順を1回繰り返す. 2%のアモニオンエチルアセタート溶液の5mlを加え,10分間渦巻き,8000rpmで5分間遠心分離.そして,上位生物を集めます.残留物にさらに5mlの2%アモニアエチルアセタート溶液を加え,抽出手順を繰り返す.上層物質を組み合わせ,50°Cの窒素流の下で蒸発して乾燥する.20% メタノール溶液 1ml を加える30秒間の渦で 膜をフィルターして 儀器分析を待機します

2.3 実験条件

2.3.1 液体染色体検査条件

クロマトグラフィー列:C18 1.7μm 2.1x50mm

移動段階:A:アセトニトリル;B:水中の2mMアモニア形式

流量:0.3mL/分

コラム温度: 40 °C

注入体積: 5μL

2.3.2 質量スペクトロメトリ条件

表 3 イオン源パラメータ

3実験の結果

3.1 標準色素図

4つのアミド抗生物質とそれらの内部基準の決定は6分以内に完了しました.すべてのピークは尾根なしで良いピーク形を示しました.そして各化合物は満足のいく反応を示しました実験要求を満たしている.

図 1 4 アムフェニコール抗生物質と内部標準の染色体表 (クロラムフェニコール 0.2ng/mL,その他の抗生物質 1ng/mL)

3.2 線形範囲

適量のアミドアルコール混合標準溶液を採取し,標準曲線を準備するために一連の濃度まで段階的に稀釋する.定量分析のために同位体内標準方法が使用されました線形範囲は,クロラムフェニコールでは0.2〜10 ng/mL,フローラフェニコルアミン,チアンフェニコル,フローラフェニコールでは1〜50 ng/mLでした.線形検出結果と既知の濃度との間の偏差は最大許容される偏差よりも小さいR2値は 0.9958 から 0 までです.9998すべてのコンポーネントに優れた線形性を示しています.

表 4 化合物の線形範囲

図2 4つの化合物の校正曲線データ

3.3 LODとLOQ

中国の国家食品安全基準GB 31658.20-2022では,この方法では,クロラムフェニコールの検出限界 (LOD) は0.1μg/kgであり,定量化限界 (LOQ) は0であると規定している.2μg/kg; シアンフェニコル,フロルフェニコル,フロルフェニコルアミンの場合,LODは0.5μg/kg,LOQは1μg/kgである.すべての標的化合物における検出限界 (LOD) と定量化限界 (LOQ) の指定濃度における信号/ノイズ比は,3と10を大幅に上回る国内規格に規定されている感度要件を満たす.

表 5 各化合物の検出および定量化限界

図3 4つの化合物の検出限界と定量化限界の染色体図

3.4 精度試験

低濃度,中濃度,高濃度のアンフェニコール標準混合物溶液を服用し,保持時間とピーク領域の偏差を比較するために6回の連続注射を行います.結果は以下の表に示されています.すべてのアンフェニコール化合物の保持時間の偏差は1%未満で,ピークエリアの偏差は5%未満でした.国定規格で指定されているRSD ≤ 15%の精度要件を満たす.

表 6 各化合物の精度試験

図 4 4 アミドアルコール化合物の精密染色体

3.5 マトリックス・スピッキング復旧試験

この検出方法の精度は,ピーク復元試験を用いて評価された.プリトリートメントのために,白質マトリックスサンプルに既知の標準サンプル濃度を異なる比率で追加する.高温でマトリックスピークしたサンプルを準備する各濃度レベルを6回独立して分析した.補給前と補給後のマトリックスで検出された濃度を比較して回復率を計算した.鶏肉マトリックスでは,すべての化合物のピーク回収率は94.5%から107.2%に及び,CVは5%以内であった.精度が方法要件を満たしていることを示す.

表 6 調味料のある鶏肉マトリックスにおける化合物の回収率

3.6 サンプル試験

スーパーマーケットからランダムに購入された鶏乳房サンプルを抽出し,前述のサンプル予備処理方法を使用して浄化しました.4つのアミド抗生物質のうち 1 つも検出されなかった..

図 5 スーパーマーケットの鶏乳サンプルにおける4つのアミドアルコール化合物の染色体

4結論

この方法では,動物性食品のアンフェニコール抗生物質の測定のために,Wayeal LCMS-TQ9200液体染色体質量スペクトロメトリシステムを使用しています.陽性および陰性イオンモードの両方で化合物の同時獲得を可能にするデータは,この方法により,尾根がなく,形状の良い染色ピークが得られ,その感度が国家標準の要求を満たしていることを示しています.線形相関係数は0より大きい..996回の連続注射におけるすべての化合物の保持時間の偏差は1%以内であり,ピークエリアの偏差は5%以内であり,良好な精度を示しています.鶏肉マトリックスでの回復率は 94.5% から 107.2%,CV は 5% 以内 で,精度 が 方法論 的 な 要求 に 準拠 し て いる こと を 示し て い ます.スーパーマーケット から ランダム に 購入 さ れ た 鶏 の 胸 の サンプル が 分析 さ れ まし た.4つのアンフェニコル抗生物質のどれも検出されなかったこれは,Wayealの液体染色体質量スペクトロメトリシステムで装備された方法が,対象サンプルの質的および定量的な日常検出の要件を満たす.