2024-10-22
化粧品における6メチルクマリンの液体染色体測定
1.1 計器配置
表 1 液体染色体の配置リスト
| 違う 違う | モジュール | Qty |
| 1 | PB3210 バイナリーポンプ | 1 |
| 2 | CT3400 コラムオーブン | 1 |
| 3 | AS3210 オートサンプラー | 1 |
| 4 | UV3210 紫外線検出器 | 1 |
| 5 | ノバクロムSC18 4.6*250mm,5μm | 1 |
| 6 | スマートラボ ワークステーション | 1 |
1.2 実験方法
1.2.1 反応剤
表 2 反応剤のリスト
| 違う 違う | 反応剤 | 純度 |
| 1 | メタノール | クロマトグラフィックグレード |
| 2 | 6 メチルキュマリン | 99% |
| 3 | アモニウム二水素リン酸 | AR |
| 4 | リン酸 | GR |
1.2.1.1 6 メチルキュマリンの標準原料溶液 (1000mg/L): 適切な量の6 メチルキュマリンを摂取する.メタノールで溶け,量を固定し,濃度1000mg/Lの標準原料溶液に調製する.
1.2.1.2 6 メチルキュマリンの標準作業溶液:6 メチルクマリン標準原料溶液の適量のパイペットで,メタノールで希釈され,濃度0の作業曲線を準備する..1mg/L,0.5mg/L,1.0mg/L,3.0mg/L,5.0mg/Lおよび10.0mg/L
1.2.1.3 ナトリウム二水素リン酸バッファ溶液: 3.12g のナトリウム二水素リン酸を採取し,溶けるために水を加えて1000mL に稀釋し,リン酸のpHを3に調整する.5.
1.2.2 染色体検査条件
表 3 染色体検査条件
| クロマトグラフィー列 | ノバクロムSC18 4.6*250mm 5μm | ||
| 移動段階 | A:メタノールB:ナトリウム二水素リン酸バッファ溶液 | ||
| 流量 | 1mL/分 | ||
| コラム温度 | 35°C | 波長 | 275nm |
| 注射量 | 10μL | ||
表 4 グラディアントエルーションプログラム
| 時間 (分) | 移動段階A | 移動段階B |
| 0 | 55 | 45 |
| 11 | 55 | 45 |
| 12 | 90 | 10 |
| 40 | 90 | 10 |
| 41 | 55 | 45 |
| 50 | 55 | 45 |
1.2.3 サンプル予備処理
試料の1g (精度0.001g) を10mLの体積コブに取り込み,5mLのメタノールを加え,渦巻きと揺さぶって試料を抽出溶液と完全に混ぜ,超音波抽出を20分間行う.,室温まで冷却し,その後メタノールで体積を10mLに固定し,混合し,それから遠心管に移し,5分間にわたって5000r/minで遠心させます.そして上位物質は0を通過してフィルターされます.45μm 有機膜で,次に検査します.
2実験の結果
2.1 システムの適性
図 1 標準の染色体 10mg/L
表 5 10mg/L 標準の試験データ
| 化合物 | 保存時間 | ピークエリア | 理論的なナンバープレート |
| 6 メチルキュマリン | 11.168 | 574.285 | 15854 |
注:染色図とデータは,6メチルキュマリンはピークの形が良好で,目標ピークの周りに他のピークはなく,理論上のプレート数は高く,実験要求を満たす.
2.2 標準曲線
図 2 標準曲線の試験結果
注: 染色体は,6メチルキュマリンの曲線の相関係数のR値は0以上であることを示しています.9999実験要求を満たしている.
2.3 繰り返し可能性
3 mg/L の重複性染色体 6 回の注射の標準
表 6 3mg/ L の重複性データ 6 注射の標準表 6 3mg/ L の重複性データ 6 注射の標準表s
|
6 メチルキュマリン |
違う 違う | 保存時間 | ピークエリア |
| 1 | 11.159 | 177.710 | |
| 2 | 11.161 | 176.711 | |
| 3 | 11.142 | 177.128 | |
| 4 | 11.152 | 176.985 | |
| 5 | 11.150 | 177.469 | |
| 6 | 11.149 | 177.629 | |
| RSD (%) | 0.061 | 0.222 |
注:上記の表のデータによると,6メチルクマリンのリテンションタイム重複性のRSDは0.061%,ピークエリア重複性のRSDは0.222%である.繰り返し能力は良好で,実験要求を満たしている.
2.4 検出制限
図 4 標準 0.02mg/L の試験染色体
表 7 0.02mg/L 標準の試験データ
| 化合物 | 保存時間 | ピークエリア | SNR |
| 6 メチルキュマリン | 11.153 | 1.208 | 19.296 |
注:上記データによると,検出限界として信号/ノイズ比の3倍を計算し,6メチルクマリンの検出限界は0.004mg/Lであることが判明しました.実験条件を満たしている.
2.5 化粧品サンプルの試験結果
図 5 化粧品サンプルのテスト染色体
注: 化粧品サンプルでは6メチルキュマリンが検出されなかった.
2.6 注意
高速遠心分離機を使用するときは,チューブが対称的に配置され,反対側にあるチューブ全体の質量が同じであることを注意してください.
3結論
この記事で紹介された分析方法は,6メチルクマリンの検出における"化粧品の安全性および技術基準"を参考にして,UV検出器を搭載した Wayeal 高性能液体染色体 LC3200シリーズを用いて実験結果は,6メチルクマリンのピーク形がシステム適応性試験で良好であり,目標ピークの周りに他のピークがないことを示しています.理論上はプレート番号が高く曲線の相関系数R値は0以上である.99996メチルクマリンのリテンションタイム再現性のRSDは0.061%,ピークエリア再現性のRSDは0.222%,これは良い再現性を示しています. 6メチルクマリンの検出限界は0です..004mg/L.上記すべての試験結果は標準方法における計器の要件を満たしています.
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