豚肉中のニトロイミダゾール残留物：GB 31658.23-2022 に準拠して検証された Wanyi LCMS-TQ9200 LC-MS/MS 法

ニトロイミダゾールは、嫌気性細菌やトリコモナス原虫に効果的に作用する合成抗菌薬および抗原虫薬です。かつては家畜や養殖業で消化器感染症や原虫病の制御に広く使用され、生存率を向上させていました。しかし、親薬物とその代謝物は明らかに毒性があります。動物体内ではいくつかの活性代謝物に急速に代謝され、その一部は親化合物よりもはるかに長く組織中に残留します。

毒性学的研究によると、ニトロイミダゾール親薬物とその主要代謝物は、発がん性、変異原性、遺伝毒性の可能性があります。動物由来食品中の残留物は、食物連鎖を通じて人体に取り込まれ、長期間の低用量摂取は造血作用を妨げ、染色体を損傷し、遺伝子変異のリスクを高める可能性があります。そのため、中国では食品生産動物へのニトロイミダゾールの使用が禁止されており、動物由来食品中の残留物は一切許容されないため、食品安全のためには精密な残留物検査が不可欠です。

液体クロマトグラフィータンデム質量分析法による動物由来食品中のニトロイミダゾール残留物に関する国家食品安全基準であるGB 31658.23-2022が、本作業の法的根拠となります。これは、牛、羊、その他の動物マトリックス中の親薬物および代謝物を対象としています。検査機関は、豚肉を対象とした4つのターゲット化合物（メトロニダゾール、ヒドロキシメトロニダゾール、ジメトリダゾール、ヒドロキシジメトリダゾール）について、保持およびイオン化が困難なヒドロキシ代謝物を含め、サブppbレベルで、低キャリーオーバーおよび長時間の注入シーケンスにわたる安定した精度を持つバリデートされたワークフローを必要としていました。

50 mL遠心分離管にサンプル2 g（0.05 gまで正確に）を秤量し、1 ug/mL混合内部標準作業溶液10 uLを加え、30秒間ボルテックスし、10分間静置します。酢酸エチル15 mLを加え、2分間ボルテックスし、10,000 rpmで5分間遠心分離します。上清を移し、さらに酢酸エチル15 mLで抽出をもう一度繰り返します。両方の抽出液を合わせ、25℃のウォーターバス中で窒素下で乾燥するまで蒸発させます。

残留物を0.1 mol/L塩酸5 mLに溶解し、1分間ボルテックスし、n-ヘキサン5 mLを加え、1分間振とうし、5,000 rpmで5分間遠心分離します。ヘキサン層を捨て、別の5 mLのヘキサンで脱脂ステップをもう一度繰り返します。固相抽出カートリッジを0.1 mol/L塩酸3 mLとメタノール3 mLでコンディショニングし、水層をロードし、0.1 mol/L塩酸3 mLで洗浄し、メタノール4 mLで溶出します。溶出液を35℃で窒素下で乾燥するまで蒸発させ、水0.5 mLに再溶解し、1分間ボルテックスし、注入前にろ過します。

ブランク豚肉抽出物中のマトリックスマッチングキャリブレーションは、肉マトリックスからのイオン抑制を補償し、微量レベルでの定量信頼性を維持します。ピーク形状は良好で、テーリングはなく、酢酸エチル抽出、ヘキサン脱脂、SPEクリーンアップが1 ug/kgでの干渉を除去することを確認します。

Wanyi LCMS-TQ9200 LC-MS/MSシステムは、GB 31658.23-2022に基づき、豚肉中の4つのニトロイミダゾール残留物に対するバリデートされた方法を提供しました。対称的なピーク、0.9995以上のR2、10%以内の精度、無視できるキャリーオーバー、60%～120%以内の回収率は、このワークフローが禁止されている動物用医薬品のスクリーニングおよび確認のための日常的な定性および定量要件を満たし、食品安全リスク監視のための信頼できる技術的基盤を提供することを示しています。

• トリプル四重極MRM取得は、脂肪分の多い肉マトリックス中で0.5 ug/kgの禁止残留物を確認するために必要な選択性を提供します。
• 0.3 mL/minの2.1 mmカラム上の2 um未満のC18化学は、8分未満で4つの分析対象物を分離し、溶媒消費量を削減します。
• 同位体標識内部標準は、抽出およびSPE中の回収損失を補正し、バッチ全体で結果を安定させます。
• SPE前のヘキサン脱脂は、カートリッジと分析カラムを保護し、高スループットの残留物検査ラボでの使用寿命を延ばします。